RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)

【產(chǎn)品規(guī)格】 ：20ml /100ml

【儲(chǔ)存條件】 ：RIPA裂解液4℃保存，PMSF -20℃保存

【有效期】 ：12個(gè)月

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】 ：

RIPA裂解液是一種主要用于從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白的試劑。

RIPA 組織/細(xì)胞裂解液是利用表面活性劑等來(lái)裂解細(xì)胞膜（包括核膜）。本試劑提取的蛋白為可溶性總蛋白。

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途！

【使用說(shuō)明】 ：

如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀，請(qǐng)放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。

根據(jù)使用量，取每1mL RIPA加入10uL PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，混勻備用（PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液，用手指輕彈懸浮細(xì)胞以充分裂解。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對(duì)于組織樣品：把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

【注意事項(xiàng)】 ：

本試劑為強(qiáng)烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同時(shí)，也會(huì)將基因組一并釋放出來(lái)，若細(xì)胞量多會(huì)造成細(xì)胞裂解液粘稠：此時(shí)可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測(cè)定濃度，可加入少量 SDS（1%），煮沸后離心測(cè)濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒，請(qǐng)選擇BCA法或者Lowry法檢測(cè)蛋白濃度。

如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)