快速Lowry法蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒
Lowry法包括兩步反應(yīng)：第一步是在堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)-銅絡(luò)合物；第二步是此絡(luò)合物將Folin試劑還原，產(chǎn)生深藍(lán)色，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。定量范圍為5～100μg/ml蛋白質(zhì)。Folin試劑顯色反應(yīng)由酪氨酸、色胺酸和半胱胺酸引起，因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用。此外，不同蛋白質(zhì)因酪氨酸、色胺酸含量不同而使顯色強(qiáng)度稍有不同。
Lowry法測(cè)定較為不受脂類物質(zhì)干擾，適于脂類含量較高的樣品測(cè)定。也能耐受相當(dāng)濃度的去垢劑如SDS。
操作說(shuō)明：
1.根據(jù)需要量，取適量 Folin 酚甲試劑 A 和 B 按 50:1 混合，混合后有效期為 24 小時(shí)，過(guò)期失效。
2.根據(jù)需要量，取適量 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品用 PBS 稀釋稀釋 10 倍至濃度 0.5mg/ml。
若采用酶標(biāo)儀法(96 孔)
3.將標(biāo)準(zhǔn)品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20ul 加到 96 孔板中，加 PBS 補(bǔ)足到 20ul。
4.將樣品作適當(dāng)稀釋(好多做幾個(gè)梯度)，加 20ul 到 96 孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時(shí)
的誤差，標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)誤差比較大，所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線 1/2 后。
5.將配好的 Folin 酚甲試劑每孔加入 200ul，輕輕震動(dòng)，混勻，室溫放置 10 分鐘。
6.各孔加入 20 微升 Folin 酚乙試劑，迅速混勻，37℃放置 30 分鐘。用酶標(biāo)儀測(cè)定 A650 計(jì)算蛋白
濃度。
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