EZfusion同源重組酶多功能試劑盒,新鮮出爐
南京信帆生物所提供的 EZfusion Enzyme 專門為把 PCR 產(chǎn)物快速,定向,有效的克隆到任何目標載體而設計。有效的避免了在克隆過程中遇到的合適內切酶的選擇,化,補平,加 A,使用中間載體等等一系列復雜步驟。
無需連接酶,只需要把目標載體線性化(平末端,粘性末端都可以),PCR 產(chǎn)物無需任何酶促處理,直接和目標載體混合,20 分鐘一站式解決所有問題。無需藍白班篩選,無需擔心克隆方向,無須擔心陽性克隆比率,隨意挑取克隆,陽性率>99%.使用本試劑盒,可以定向克隆 12kb 的片段。
注意:
可以采用任何聚合酶來得到 PCR 產(chǎn)物,但是,引物和引物二聚體會對 EZfusion 有一定的抑制作用。如果 PCR 反應得到單一的目的條帶,PCR 產(chǎn)物可以用 PCR 純化試劑盒回收;如果 PCR 產(chǎn)生很多非特異性條帶,應該用凝膠回收純化目的條帶。
適用范圍:
1. PCR cloning into any vector
2. Long PCR DNA (up to 12kb) cloning
3. Gene transfer one vector to another
4. High-throughput (HTP) PCR cloning
5. In vitro joing of DNA fragments
線性化載體的制備 載體的*線性化對于重組實驗至關重要,沒有線性化的載體會產(chǎn)生非常高的背景。 線性化后的載體需要過柱純化或者凝膠回收純化。
轉化 :
1. 新鮮制備的或-70℃下保存的 100ul 感受態(tài)細胞,置于冰上,*解凍后輕輕地將細胞均勻懸浮。
2. 加入 10-12ul 連接液,輕輕混勻,冰上放置 30 分鐘。
3. 42℃水浴 90 秒,冰上放置 2 分鐘。
4. 加 600ul SOC 培養(yǎng)基,37℃ 250rpm 振蕩培養(yǎng)小時。
5. 室溫下 4000rpm 離心 5 分鐘,用吸頭吸掉 500ul 上清液,用剩余的培養(yǎng)基將細胞懸浮。
6. 將細菌均勻細致得涂布在 90mm 平板上。 注:細菌的用量依連接的效率及感受態(tài)細胞的感受率而進行適當調整。
7. 平板在 37℃下正向放置 1 小時后以吸附過多的液體,然后倒置培養(yǎng)過夜。
信帆生物對質量的控制涵蓋生物試劑、放行、市場質量反饋的全過程,包括原輔料、包裝材料、工藝用水、中間過程及成品的質量標準和分析方法的建立、取樣、檢驗和產(chǎn)品穩(wěn)定性考察和市場不良反饋樣品的復核等工作,確保產(chǎn)品的精確度、穩(wěn)定性。我們確保銷售給客戶的產(chǎn)品是能夠符合質量標準,適合客戶要求的產(chǎn)品。
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