信帆生物教你如何在實(shí)驗(yàn)室里用小技巧提高工作效率！
1 跑 page 膠的時(shí)候，小電壓跑會(huì)避免高電壓產(chǎn)生的熱量爾導(dǎo)致的膠層變形。低電壓泳道會(huì) 比大電壓泳道跑的直一些，且分離效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分離。
2. 提取質(zhì)粒的時(shí)候，zui后一步的酒精揮發(fā)很關(guān)鍵，基本上是其后續(xù)的酶切反應(yīng)的決定性因 素。 所以這一步盡量揮發(fā)長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間， 是空調(diào)吹熱風(fēng)， 或是 37 度溫箱放長(zhǎng)一點(diǎn)的時(shí)間， 我試過(guò)室溫過(guò)夜，酶切很好。
3. 做 WESTERN BLOT 的時(shí)候，大家往往會(huì)摸索一抗、二抗的濃度，封閉時(shí)間，曝光時(shí)間 等等，而每次變換其中的一個(gè)條件就需要從新跑膠、轉(zhuǎn)膜，甚至重新提蛋白，這樣會(huì)浪費(fèi)大量的時(shí)間。其實(shí)*沒(méi)有必要這樣。一次轉(zhuǎn)膜后，將 PVDF 膜晾干，裁減成小塊，保存起 來(lái)，用的時(shí)候取出一塊，沒(méi)有任何影響。這對(duì)于摸索條件的戰(zhàn)友來(lái)說(shuō)，節(jié)約了大量的時(shí)間。
4. 有關(guān)緩沖液和培養(yǎng)基配置 1）將緩沖液配方中的成分分別以 10－100 倍配成母液儲(chǔ)存，需要的時(shí)候只需將相應(yīng)的母液 混合，補(bǔ)加水稀釋即可 2）配培養(yǎng)基時(shí)通常會(huì)忘記各成分的量，如配 LB 時(shí)的三個(gè)成分不記得到底哪個(gè)是 5g，哪個(gè) 要 10 個(gè)，因此可以在常用的試劑瓶的標(biāo)簽上注明所需的量，如配 LB 時(shí)，在NaCl 瓶外注明 10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等，很方便，不需要每次配之前臨時(shí)翻書(shū)
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5. 有關(guān) PCR主反應(yīng)液配置: 在做克隆鑒定的時(shí)候經(jīng)常需要在酶切鑒定前進(jìn)行 PCR 鑒定，每次配置 PCR 反應(yīng)液很繁瑣， 可以將其配置類(lèi)似 kit 的形式，按你需要的反應(yīng)體系列表，然后放大 100 倍配置 100×主反應(yīng) 液（100 次反應(yīng)），其中含 buffer，Mg2＋，dNTPs，但不含引物和 Taq 酶，然后可以 10×分 裝或一管儲(chǔ)存在－20度，在需要的時(shí)候拿出融開(kāi)，然后按所需的 PCR 反應(yīng)個(gè)數(shù)吸取相應(yīng)的 倍數(shù)，再補(bǔ)加相應(yīng)反應(yīng)倍數(shù)的 Taq 和引物，混勻后分裝，這樣做的好處如下： 1）可的節(jié)省寶貴的時(shí)間，可早點(diǎn)收工，看球 2）避免每次反應(yīng)加樣不均的可能 3）大大減少 PCR 假陽(yáng)性的產(chǎn)生
6. 有關(guān)酶切反應(yīng)液的配置: 在做酶切時(shí)，也可以象 PCR 一樣配置主反應(yīng)液，每次反應(yīng)前先列好反應(yīng)的體系，算好需要 的反應(yīng)數(shù)，然后按所需反應(yīng)的體系按所需反應(yīng)數(shù)放大，加入 buffer、酶、水，質(zhì)粒欄空缺， 然后混合后按除質(zhì)粒 DNA 的體積分裝，然后再在每管中加入相應(yīng)體積的質(zhì)粒 DNA 酶切， 這樣做的好處如下，特別是當(dāng)同時(shí)有 10幾個(gè)陽(yáng)性克隆需要鑒定時(shí)尤為明顯。
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