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一抗和二抗的實(shí)驗(yàn)選擇

點(diǎn)擊次數(shù):1439 發(fā)布時(shí)間:2019/3/29
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一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種分析類型,如:可以應(yīng)用于 WB IHC ICC ELASA 分析等,如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型,而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證,如果抗體不適用某些分析試驗(yàn),則會在抗體說明書上標(biāo)注出來不適于某分析試驗(yàn)。

根據(jù)一抗種屬及類型選擇合適的二抗廣義上是指專門和進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體,在免疫學(xué)反應(yīng)中,經(jīng)常需要針對試驗(yàn)選擇不同的二抗,我們能為您的科研工作提供適合和全面的二抗產(chǎn)品。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,同時(shí)在后繼試驗(yàn)中也會有不同的檢測方案,因此在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求,一般來說,選擇合適的二抗需要從下面幾個(gè)方面考慮:

 

【一抗的種屬來源】 二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來源,例如:如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可);如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體,則相應(yīng)的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據(jù)一抗的物種來源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。

 

【一抗的類別亞型】 二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是 IgG 類免疫球蛋白,因此相應(yīng)的二抗就是抗 IgG 抗體。其中單克隆抗體的類別及亞類通常會在產(chǎn)品說明書中都會有描述,如果你的一抗是小鼠 IgM,那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠 IgM。如果單克隆一抗是小鼠 IgG 的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠 IgG 都可以與之結(jié)合,或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠 IgG1,那么你可以選擇抗 IgG1 的二抗,此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下,可以選用抗相應(yīng)物種 IgG。

 

【二抗的種屬來源】 一般來說,不同的種屬來源與二抗的質(zhì)量沒有必然的lian系,來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒有太多的差別。然而在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里,如雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)里,如果其中一個(gè)一抗是山羊來源的,一個(gè)是小鼠來源的,則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗,這時(shí)候,二抗就不能選擇山羊或者小鼠來源的。 有相應(yīng)的驢來源的二抗,非常適合做類似雙標(biāo)的免疫實(shí)驗(yàn)。

 

【二抗的耦聯(lián)標(biāo)記】 一般來講,耦聯(lián)到二抗上的我們探針主要有酶(辣根過氧化酶 HRP 和堿性酶 AP 或其衍生物 APAAP,PAP),熒光基團(tuán)(FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight 等)、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。對于 Western Blot 和 ELISA,常用的二抗是酶標(biāo)二抗;而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)(細(xì)胞免疫化學(xué),組織免疫化學(xué),流式細(xì)胞術(shù))中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗,免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性酶標(biāo)記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測信號,可以使用 Biotin/Avidin 檢測系統(tǒng)。在一些熒光檢測方案中,則需要選擇不同的熒光標(biāo)記;而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。

 

【是否經(jīng)過血清吸附過的二抗】如您的檢測樣本是人源的蛋白,一抗是小鼠源的單克隆抗體,二抗就需要選擇抗小鼠源的二抗,如果您對實(shí)驗(yàn)的特異性要求很高,那我們向您推薦經(jīng)過人血清吸附過的抗小鼠源的二抗,這種二抗由于經(jīng)過人血清吸附而排除了與人源組織(如 IgG 等)可能發(fā)生非特異性反應(yīng)的 IgG,因此將非特異性結(jié)合降低到低。

 
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