有人用過T細胞亞群試劑盒嗎，是由哪些試劑組成的？
T淋巴細胞亞群的檢測是細胞免疫檢測的新指標之一。隨著抗T細胞單克隆抗體的問世及各種檢測方法的建立。 T淋巴細胞亞群檢測已經(jīng)在基礎醫(yī)學和醫(yī)學研究中得到廣泛應用。
T淋巴細胞及其分類主要應用抗T細胞表面抗原McAb.根據(jù)T淋巴細胞表面分化抗原將成熟T細胞分為CD4+、CD8-和CD4-、CD8+兩大亞群，T淋巴細胞的功能與表現(xiàn)型之間的對應關(guān)系是相對的，其免疫活性可能受激活“微環(huán)境”的影響，并受MHC抗原的制約，許多研究證明，CD4+T細胞具有殺傷活性，介導Ι類抗原不相容時的靶細胞溶解。TU等研究表明，CD4+的細胞毒活性存在兩種*不同的機理，并證明TH1和TH2的細胞毒活性不同。前者強，后者弱或無活性。Dennert等發(fā)現(xiàn)，克隆化的T淋巴細胞具有輔助，細胞毒活性和遲發(fā)型超敏反應作用，這種功能的多樣性有賴于所采用的分析方法。CD4+細胞識別Ⅱ類MHC抗原，其效應的發(fā)揮也受Ⅱ類抗原的制約；CD8+細胞識別Ι類MHC抗原，發(fā)揮免疫效應也受其控制。
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| T細胞亞群檢測試劑盒 標本染色： | 1. 充分干燥（室溫2小時以上或過夜）的細胞涂片先用記號筆在標本外畫圈，然后滴加固定液50μl，室溫靜置2-3分鐘，用PBS淋洗，擦干玻片背面及細胞外的PBS。 *以下反應均需在濕盒中進行。 2. 分別滴加抗人CD3、CD4、CD8單抗適量（10-30μl）， 4℃過夜，PBS淋洗3次。 3. 滴加生物素標記抗小鼠IgG適量（10-30μl），37℃孵育30-45分鐘，PBS淋洗3次。 4. 滴加堿性酶標記鏈霉卵白素適量（10-30μl）37℃孵育30-45分鐘，PBS淋洗3次。 5. 滴加顯色劑30-50μl，室溫顯色20-40分鐘?？稍陲@微鏡下觀察，待細胞膜上出現(xiàn)紅色標記物時，用PBS淋洗。 6. 滴加細胞核復染液30-50μl，30秒后自來水淋洗。 7. 滴加封片劑，蓋片封片，鏡檢。如不需保存亦可用水替代封片劑蓋片鏡檢。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 標本制備： | 取肝素抗凝（25μl/ml）的靜脈血1~2ml，PBS稀釋1-2倍后，沿裝有等量淋巴細胞分離液的試管壁混勻緩慢加至液面上層，保持兩種液體界面清晰，離心（2000轉(zhuǎn)/分）15-20分鐘，吸取兩液面交界處的單個核細胞層，加5倍PBS，離心（1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，棄上清液，沉淀即為單個核細胞。利用試管中剩余的少許回流液體（約一滴）混勻細胞，制成單個核細胞懸液。滴30μl細胞懸液于載玻片上，靜置2分鐘使細胞下沉粘附于玻片上，吸去液體，快速吹干或37℃溫箱1小時烤干?；蛴肞BS將單個核細胞調(diào)至2×105個/ml，離心涂片機1000轉(zhuǎn)離心1-2分鐘制片，快速吹干或37℃溫箱1小時烤干。涂片前取防脫片劑5-10μl均勻推片，亦可用棉簽粘取防脫片劑均勻涂于干凈玻片上，待干后制備細胞涂片，以防掉片。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 觀 察： | 高倍鏡下選取染色好的視野記數(shù)100-200個單個核細胞，細胞表面有紅色標記物為陽性細胞。算出陽性率。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 正常參考值： | 正常人外周血中，陽性細胞百分率一般在：CD3，60-80%；CD4，35-55%；CD8，20-30%；CD4/CD8的比值在1.5-2.0范圍內(nèi)。 |
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